實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)蛋白表達(dá)水平常用的工具是科研ELISA試劑盒，然而面對(duì)市場(chǎng)上好多個(gè)品牌以及各種各樣的規(guī)格，好多研究者通常都不知道該從哪里著手。要是能正確選擇并且規(guī)范使用ELISA試劑盒，那可是和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性以及可重復(fù)性直接相關(guān)的。

科研ELISA試劑盒怎么選

首先，要關(guān)注試劑盒所檢測(cè)的物種以及靶標(biāo)蛋白，看其是不是和你的樣本相匹配。不同的試劑盒，適用的樣本類型，像細(xì)胞上清、組織裂解液、血清等，是存在差異的，在購(gòu)買之前，一定要仔細(xì)核對(duì)說(shuō)明書里的樣本驗(yàn)證數(shù)據(jù)。其次，靈敏度與檢測(cè)范圍屬于關(guān)鍵指標(biāo)，靈敏度應(yīng)當(dāng)是低于預(yù)期樣本的最低濃度的，檢測(cè)范圍要能夠覆蓋所有樣本的濃度區(qū)間。

操作步驟有哪些關(guān)鍵點(diǎn)

樣本制備的環(huán)節(jié)當(dāng)中，要防止出現(xiàn)反復(fù)凍融的情況，建議采用分裝的方式來(lái)進(jìn)行保存。加樣之時(shí)，要留意移液器的校準(zhǔn)以及槍頭的更換，以防引起交叉污染。孵育的溫度以及時(shí)間，要嚴(yán)格依照說(shuō)明書去執(zhí)行，恒溫箱或者水浴鍋需要預(yù)先進(jìn)行預(yù)熱，并且校準(zhǔn)溫度。洗滌的步驟不能予以簡(jiǎn)化，推薦運(yùn)用自動(dòng)洗板機(jī)并配合手動(dòng)拍板，以此確保每次洗滌之后殘留液的量保持一致。

結(jié)果不理想怎么辦

當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2低于0.99之際，要去檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋是不是準(zhǔn)確，推薦運(yùn)用帶濾芯吸頭去進(jìn)行并充分混勻。高背景值一般是源于洗滌不充分或者封閉液失效，能夠增加洗滌次數(shù)或者更換新鮮封閉液。無(wú)信號(hào)或者信號(hào)過(guò)弱的情況則需要驗(yàn)證抗體是不是失效，與此同時(shí)排查底物是不是變質(zhì)。記錄每一次異?，F(xiàn)象并且對(duì)照說(shuō)明書troubleshooting表格逐步展開排查，逐步積累經(jīng)驗(yàn)便能夠提升成功率。