一種被稱作微板法生化檢測(cè)的，具備高效以及微量特性的分析技術(shù)，在食品、環(huán)境和生物樣本于其中的快速篩查方面有著廣泛應(yīng)用，它借助微孔板能同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行處理，再配合酶標(biāo)儀用于讀取反應(yīng)信號(hào)，如此一來(lái)便能夠大幅提高檢測(cè)通量并且降低試劑消耗，而掌握該方法的核心要點(diǎn)，對(duì)于規(guī)范操作流程以及保障數(shù)據(jù)可靠是有幫助的。

微板法生化檢測(cè)的原理是什么

微板法生化檢測(cè)的關(guān)鍵之處在于，它把生化反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移到了96孔或者384孔的微孔板當(dāng)中。每一個(gè)微孔都作為一個(gè)獨(dú)自的反應(yīng)單元，借助酶標(biāo)儀來(lái)測(cè)量吸光度、熒光或者化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。拿平常的辣根過(guò)氧化物酶體系來(lái)講，底物顯色以后顏色的深淺與待測(cè)物的濃度成比例，并且是遵循朗伯 - 比爾定律的。和比色皿一次僅測(cè)一個(gè)樣本相比，微板法能夠一次性同時(shí)獲取數(shù)十甚至數(shù)百個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，從而極大地提高了實(shí)驗(yàn)效率。

在實(shí)際應(yīng)用里頭，反應(yīng)體系的均一性會(huì)對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性產(chǎn)生直接影響。微板法有這樣的要求，就是每孔加樣的體積得保持一致，一般是控制在50到200微升。微孔板的材質(zhì)必須具備低背景吸附的特性，以此來(lái)防止樣本或者試劑粘附在孔壁上面。在孵育階段，要保證整板的溫度是均衡的，所以推薦去使用具有溫控功能的微孔板振蕩器。在讀數(shù)之前，還需要去檢查有沒(méi)有氣泡或者液滴掛壁，這些細(xì)節(jié)都是確保檢測(cè)靈敏度的基礎(chǔ)。

微板法生化檢測(cè)的操作要點(diǎn)

微板法里，加樣環(huán)節(jié)屬于最容易出錯(cuò)的步驟，建議運(yùn)用多通道移液器，按照列或者行的順序來(lái)加樣，先把緩沖液以及底物加入進(jìn)去，最后將啟動(dòng)反應(yīng)的樣本或者酶液加入。每一回更換一種試劑，都必須更換槍頭，以此防止交叉污染。對(duì)于揮發(fā)性很強(qiáng)或者容易氧化的試劑，加樣的過(guò)程應(yīng)該控制在冰浴的環(huán)境里去操作。加樣完成之后，輕輕拍打板壁來(lái)混勻，不可以劇烈震蕩，不然會(huì)產(chǎn)生氣泡，進(jìn)而影響光路。

要依據(jù)檢測(cè)指標(biāo)對(duì)孵育條件予以優(yōu)化，溫度通常設(shè)定為25℃或者37℃，時(shí)間是從幾分鐘到幾個(gè)小時(shí)有所不同，孵育的時(shí)候，微孔板應(yīng)當(dāng)加蓋密封，這樣既能防止蒸發(fā)，又能對(duì)光敏物質(zhì)起到避光保護(hù)作用，要是使用恒溫培養(yǎng)箱，需要提前預(yù)熱，還要放置濕盒來(lái)維持濕度，讀數(shù)之前要是孵育溫度不一樣，要把微孔板恢復(fù)到室溫，而后用酶標(biāo)儀選擇相應(yīng)波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，建議設(shè)置空白對(duì)照以及標(biāo)準(zhǔn)曲線孔，用來(lái)扣除背景并計(jì)算未知樣濃度。

微板法生化檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)有哪些

微板法具有一個(gè)極為突出的優(yōu)勢(shì)，那就是樣本以及試劑的消耗量極低，傳統(tǒng)比色法的話，每個(gè)用于檢測(cè)的樣品需要1到3毫升反應(yīng)液，并且微板法僅僅只需要50到200微升，試劑成本能夠下降80%以上，對(duì)于微量或者珍稀樣本，像細(xì)胞培養(yǎng)上清、環(huán)境水樣這類，這一特點(diǎn)是格外實(shí)用的，同時(shí)微板法搭配自動(dòng)化移液工作站，能夠讓全流程實(shí)現(xiàn)無(wú)人進(jìn)行值守操作，適合大規(guī)模的篩查任務(wù)。

還有一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于，其數(shù)據(jù)平行性表現(xiàn)優(yōu)良。微板法是在同一塊板上達(dá)成所有反應(yīng)以及讀取數(shù)據(jù)，這樣一來(lái)消除了不同批次之間溫度、光照等環(huán)境波動(dòng)所產(chǎn)生的影響。借助酶標(biāo)儀的動(dòng)力學(xué)模式，能夠持續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，進(jìn)而獲取初始速率等動(dòng)態(tài)參數(shù)。再結(jié)合軟件自動(dòng)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行濃度的反算，極大程度地減少了手動(dòng)計(jì)算所產(chǎn)生的誤差。正是基于這些特征，使得微板法成為生化檢測(cè)領(lǐng)域當(dāng)中的主流技術(shù)之一。