酶活性檢測試劑盒，在生物化學領域應用廣泛，在食品工業(yè)領域也應用廣泛，在環(huán)境監(jiān)測等領域照樣應用廣泛，它能夠快速地定量樣本之中特定酶的活力。但是面對市場之上種類繁多的產(chǎn)品，很多人并不清楚該如何挑選出適合自身實驗的那一款。實際上，只要把握住幾個核心考察要點，便能夠做出明智的選擇。

如何選擇適合的試劑盒

首先，得看檢測原理是不是跟你的樣本類型相匹配，比色法與熒光法是最為常見的兩類，比色法適宜澄清液體樣本，熒光法靈敏度更高，能夠?qū)ξ⒘炕钚杂枰詸z測，像檢測土壤里的脫氫酶活性，樣本常常有色或者呈現(xiàn)渾濁狀態(tài)，熒光法更能夠防止干擾，另外需要確認試劑盒所提供的緩沖液pH以及離子強度是不是和你的酶最適條件相同，這會對結果的線性范圍產(chǎn)生直接影響。

其次，得考察試劑盒穩(wěn)定之狀況以及儲存所需條件。多數(shù)用于酶活性檢測的試劑盒，是需要在零下二十攝氏度進行冷凍保存的，要是反復進行凍融的話，就會致使酶標準品發(fā)生失活的情況。優(yōu)先去選擇附帶以凍干粉形式存在標準品的試劑盒，它們相較于液體標準品而言，更能夠耐受運輸以及短期在室溫下放置的狀況。查看說明書里所標注的開瓶之后的有效期，如果上面標注著“復溶之后在二至八攝氏度能夠穩(wěn)定七天”，那就表明其配方是經(jīng)過優(yōu)化處理的，是適合進行分批并且多次實驗的。

檢測結果不穩(wěn)定怎么辦

先確保操作前所有試劑都平衡到室溫，因為溫差會致使酶促反應速率產(chǎn)生波動。加樣的時候要用校準過的移液器，并且每往一管加樣就要更換槍頭，以此回避交叉污染。預實驗的時候建議設置三個重復孔，計算變異系數(shù)，要是CV值超過了10%，就得排查是樣品自身不均一還是加樣存在誤差。每次反應的環(huán)境溫度都要記錄，恒溫孵育器比水浴鍋更具可靠性，這是由于水浴鍋存在溫度梯度導致的。

必須當天新鮮配制標準曲線，不要為省試劑而用上周稀釋好的標準品，因為即便凍干粉復溶后，長期存放也會降解，每次檢測都要帶一個已知活性的質(zhì)控樣本，像商品化酶對照品那樣，若質(zhì)控值偏離預期范圍超過15%，表明試劑盒或操作步驟有問題，要及時查找原因而非盲目相信數(shù)據(jù)。

操作有哪些常見誤區(qū)

疏忽樣本前期處理屬于首要誤區(qū)。針對組織或者細胞樣本 ，裂解之后務必要離心獲取上清 ，沉淀里的碎片會吸附酶蛋白或者干擾光路。裂解液之中添加蛋白酶抑制劑能夠防止目標酶被降解 ，但要留意抑制劑濃度不可過高 ，不然會抑制酶活性自身。另外 ，不要在反應體系里混入有機溶劑 ，比如乙醇或者DMSO ，它們會改變酶構象。

反應時間必然得精準計時，好多人慣于“差不多”讀秒，然而酶活性檢測采用的是初始速率法，每往后延遲5秒讀數(shù)，吸光度就有可能降低20%，要運用帶有倒計時功能的酶標儀，從添加啟動底物的那一瞬間開始計時，要是手動操作，需盡可能維持每孔添加底物的間隔相同，而且終止液與底物的加入順序絕不能顛倒，不然反應就沒法停止，數(shù)值會持續(xù)漂移。