生物技術(shù)領(lǐng)域里，細(xì)胞培養(yǎng)屬于最基礎(chǔ)的環(huán)節(jié)，同時(shí)也是最容易出現(xiàn)差錯(cuò)的環(huán)節(jié)當(dāng)中的一個(gè)。有好多人覺(jué)得，只要進(jìn)行無(wú)菌操作便能夠成功，可實(shí)際上，溫度、濕度、營(yíng)養(yǎng)配比以及細(xì)胞密度，都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生直接的影響。要是掌握了正確的培養(yǎng)方法，那么細(xì)胞活率以及實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，就能夠得到大幅度的提升。

如何選擇適合的培養(yǎng)基

不同種類的細(xì)胞系，對(duì)于營(yíng)養(yǎng)方面的需求，存在著顯著的差異，貼壁細(xì)胞一般來(lái)講，需要添加血清的DMEM或者RPMI - 1640，然而懸浮細(xì)胞或許更傾向于無(wú)血清的配方，在進(jìn)行選擇之前，應(yīng)當(dāng)先去查閱關(guān)于細(xì)胞來(lái)源的文獻(xiàn)，留意葡萄糖的濃度、谷氨酰胺的含量以及緩沖體系是否相匹配，在實(shí)際的生產(chǎn)過(guò)程當(dāng)中，建議使用同批次的培養(yǎng)基去做小規(guī)模的預(yù)實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)胞的形態(tài)以及增殖曲線。

怎樣判斷細(xì)胞是否污染

導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因是污染，然而在早期通過(guò)肉眼是很難發(fā)現(xiàn)的。細(xì)菌污染會(huì)致使培養(yǎng)基變黃且變得渾濁，在24小時(shí)內(nèi)pH會(huì)急劇下降；真菌污染能夠看到絮狀的菌絲；支原體污染要隱蔽許多，會(huì)造成細(xì)胞生長(zhǎng)速度緩慢、形態(tài)出現(xiàn)異常。要定期運(yùn)用PCR或者染色法來(lái)檢測(cè)支原體，與此同時(shí)每天都要在倒置顯微鏡之下觀察背景以及細(xì)胞邊緣的狀態(tài)。

細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)是什么

在貼壁細(xì)胞將培養(yǎng)瓶底部占據(jù)達(dá)到百分之八十至百分之九十之際，便應(yīng)當(dāng)實(shí)施傳代操作，倘若細(xì)胞過(guò)于密集那將會(huì)引發(fā)接觸抑制狀況出現(xiàn)或者致使細(xì)胞老化現(xiàn)象產(chǎn)生。對(duì)于懸浮細(xì)胞而言，其所依據(jù)的則是密度達(dá)到大約每毫升一乘以十的六次方個(gè)這種情形才算適宜。在進(jìn)行傳代期間，胰酶的消化時(shí)間得把控精準(zhǔn)，要是時(shí)間過(guò)長(zhǎng)那就會(huì)對(duì)細(xì)胞膜造成損傷，要是時(shí)間過(guò)短細(xì)胞又會(huì)出現(xiàn)脫落不完全的情況。每一次都對(duì)傳代比例以及恢復(fù)貼壁所需時(shí)間作好記錄，如此能夠有助于找尋到最為穩(wěn)定的操作窗口。

于您平常的細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域以內(nèi)，有無(wú)碰見(jiàn)過(guò)反復(fù)的污染現(xiàn)象，或者細(xì)胞狀態(tài)忽然變差的狀況呢？熱烈歡迎您分享遇見(jiàn)的具體問(wèn)題。