在分子生物學(xué)實驗室里，PCR反應(yīng)試劑盒屬于基礎(chǔ)工具，它的性能是會直接對依此得出的實驗結(jié)果的可靠性，乃至可重復(fù)性產(chǎn)生影響的。一套符合標準的試劑盒，應(yīng)當涵蓋DNA聚合酶、緩沖液、dNTPs以及Mg2?等核心成分，并且是經(jīng)歷過嚴格質(zhì)量把控的。正確地去挑選以及使用試劑盒，是能夠明顯提高擴增效率以及特異性的，還能夠減少實驗優(yōu)化所需時間的。

PCR反應(yīng)試劑盒的選擇要點

不同的實驗?zāi)康模瑢τ谠噭┖械囊?，差異是十分大的。進行常規(guī)基因檢測的時候，可以選擇基礎(chǔ)型試劑盒，然而對于高GC含量模板或者長片段擴增而言，就需要專用配方。建議優(yōu)先去考慮預(yù)混型試劑盒，此類產(chǎn)品已經(jīng)將各個組分按照最優(yōu)比例進行了混合，在操作的時候，僅僅需要加入引物以及模板就行，如此能夠有效降低加樣誤差以及污染風險。同時要去關(guān)注試劑盒的靈敏度指標，針對低拷貝模板檢測，需要具備更高的擴增效率。

擴增效率與特異性評估

擴增曲線呈現(xiàn)出典型的S型，并且Ct值是合理的，這表明試劑盒的性能是良好的。而判斷特異性最直接的那種方法，是運行熔解曲線分析，單一尖銳的熔解峰意味著不存在非特異性產(chǎn)物。對于終點法檢測而言，瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)當僅僅出現(xiàn)目標條帶，不存在引物二聚體或者彌散條帶。建議運用陽性對照以及陰性對照同步進行驗證，借此確保試劑盒在您的實驗體系里表現(xiàn)得穩(wěn)定。

保存與使用注意事項

多數(shù)PCR反應(yīng)試劑盒要于-20℃避光去保存，反復(fù)凍融的話會致使酶活性以及dNTPs穩(wěn)定性有所降低。分裝保存乃是延長使用壽命的有效辦法，取用時得用潔凈的槍頭以及冰盒。配制反應(yīng)體系時要嚴格依照說明書所推薦的組分用量，過度去增加模板量反倒可能會抑制擴增。加樣完成之后要充分混勻并進行短暫離心，以此避免氣泡對熱傳導(dǎo)效率造成影響。

當您運用PCR反應(yīng)試劑盒之際，有無碰到過重復(fù)性算不上好或者擴增遭遇失敗這類狀況呢？歡迎于評論區(qū)域分享您所擁有的經(jīng)驗。