首次培養(yǎng)的細(xì)胞，是從機(jī)體取出后的原代細(xì)胞，此細(xì)胞在形態(tài)方面、功能層面上，與體內(nèi)狀態(tài)是最為接近的，它是基礎(chǔ)研究里最常用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。然而，這類細(xì)胞對(duì)于操作環(huán)境以及手法的要求是極高的，稍微有一點(diǎn)不注意，便會(huì)對(duì)活性造成影響，甚至?xí)率箤?shí)驗(yàn)失敗。那下面依據(jù)實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)問(wèn)題，來(lái)聊聊分離培養(yǎng)當(dāng)中的幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

原代細(xì)胞是什么

有不少新手易于將原代細(xì)胞跟細(xì)胞系弄混，原代細(xì)胞是直接源自動(dòng)物或者人體組織的，沒(méi)有經(jīng)過(guò)多次傳代，保留著來(lái)源組織特有的功能以及標(biāo)志物，像從肝組織分離出來(lái)的肝細(xì)胞，依舊具備代謝酶活性，而從乳腺組織分離出來(lái)的上皮細(xì)胞，是保留激素響應(yīng)能力的，這種特性讓其在機(jī)制研究里不可替代，不過(guò)同時(shí)也表明它更為“嬌貴”。

原代細(xì)胞如何培養(yǎng)

決定成敗的第一步是分離過(guò)程，組織剪碎后要用特定酶消化，消化時(shí)間得嚴(yán)格把控，時(shí)間過(guò)短細(xì)胞數(shù)量不夠，過(guò)長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞膜，像胰蛋白酶，在37度水浴中消化10到15分鐘較常見(jiàn)，不過(guò)不同組織差異明顯，終止消化后要用完全培養(yǎng)基輕柔吹打，要注意力度，防止產(chǎn)生氣泡沖擊細(xì)胞。

原代細(xì)胞質(zhì)量怎么控

純化環(huán)節(jié)不能忽視，鑒定環(huán)節(jié)同樣不能忽視。消化后的細(xì)胞懸液里頭含有多種細(xì)胞類型，能用差速貼壁法進(jìn)行富集，也能用密度梯度離心法進(jìn)行富集。若要分離成纖維細(xì)胞的話，利用它貼壁快的特性，可在30分鐘之后，把未貼壁的上皮細(xì)胞給轉(zhuǎn)移到新的皿中。鑒定的時(shí)候，除了要觀察形態(tài)之外，還得用免疫熒光檢測(cè)特異性標(biāo)志物，或者用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)特異性標(biāo)志物，以此來(lái)確保純度能夠達(dá)標(biāo)。

原代細(xì)胞用在哪

培養(yǎng)進(jìn)程里的環(huán)境維系屬于持續(xù)不斷的挑戰(zhàn)，這類細(xì)胞對(duì)于培養(yǎng)基成分敏感，一般需要添加百分之十至百分之二十的胎牛血清，并且補(bǔ)充谷氨酰胺以及生長(zhǎng)因子，培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度、溫度波動(dòng)，還有操作臺(tái)的無(wú)菌狀態(tài)，任何一個(gè)細(xì)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題都有可能致使細(xì)胞老化或者污染，建議構(gòu)建嚴(yán)格的質(zhì)控記錄，從培養(yǎng)基批次直至操作時(shí)間都予以追蹤。

你實(shí)驗(yàn)室于培養(yǎng)原代細(xì)胞之際，最為常遇的難點(diǎn)是組織消化未曾徹底完成，還是傳代之后形態(tài)出現(xiàn)了變化呢？