當(dāng)你去挑選PCR反應(yīng)試劑盒時(shí)，實(shí)際上是在為自己的實(shí)驗(yàn)去選定一套具備穩(wěn)定性、高效性的核心反應(yīng)體系。不管是針對(duì)基因表達(dá)分析，亦或是病原檢測(cè)而言，試劑盒所含有的穩(wěn)定性以及特異性，會(huì)直接對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果所擁有的可靠性與重復(fù)性起到?jīng)Q定性作用，而這一點(diǎn)相較于單純?nèi)ケ容^價(jià)格，那可是要關(guān)鍵許多的事。

體系與機(jī)型如何匹配

PCR儀器的不同品牌，對(duì)于反應(yīng)體系的升降溫速率以及檢測(cè)方式，有著各不相同的要求。在選購(gòu)試劑盒的時(shí)候，首先需要確認(rèn)的是，它是不是與你所使用的機(jī)型相互兼容，特別是熒光檢測(cè)通道那一塊兒是否匹配。有一些試劑盒，會(huì)專門去注明適配某幾款主流機(jī)型，并且給出經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的ROX參比染料濃度，這樣做能夠有效地避免，因?yàn)橛布患嫒荻鴮?dǎo)致的熒光信號(hào)出現(xiàn)異常情況，或者擴(kuò)增曲線產(chǎn)生變形現(xiàn)象。

穩(wěn)定性如何保障

試劑盒穩(wěn)定性，主要體現(xiàn)于反復(fù)凍融耐受度，以及長(zhǎng)途運(yùn)輸后活性保持，優(yōu)質(zhì)試劑盒，通常采用優(yōu)化緩沖液體系，和酶修飾技術(shù)，使混合酶在零下二十?dāng)z氏度環(huán)境下，可穩(wěn)定保存一年以上，且能耐受五至七次反復(fù)凍融，而不明顯損失活性，選購(gòu)時(shí)留意產(chǎn)品說(shuō)明中穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，或向廠家索要質(zhì)檢報(bào)告，了解其批間差和效期驗(yàn)證結(jié)果。

特異性怎樣提升

PCR實(shí)驗(yàn)里，最令人頭疼的問(wèn)題是，非特異性擴(kuò)增以及引物二聚體。好的試劑盒能做到，在酶體系中添加特異性增強(qiáng)因子，像熱啟動(dòng)抗體或者化學(xué)修飾，以保證在常溫時(shí)不開(kāi)啟聚合反應(yīng)同時(shí)還呈現(xiàn)讓熔解曲線峰形更為干凈的效果，能顯著提高引物與模板結(jié)合嚴(yán)謹(jǐn)性的優(yōu)化緩沖液離子配比，可從根源處減少假陽(yáng)性信號(hào)產(chǎn)生。

擴(kuò)增效率怎么優(yōu)化

獲得更強(qiáng)信號(hào)與否取決于擴(kuò)增效率，而這又決定了你是否能用更少模板。一款反應(yīng)試劑盒若高效，應(yīng)能支持寬泛模板濃度范圍，且在低拷貝數(shù)樣本中保持線性擴(kuò)增。體現(xiàn)在數(shù)據(jù)方面，標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率大概在 -3.3 左右，R2 值大于 0.99。這樣的性能可讓你在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件時(shí)節(jié)省大量時(shí)間，無(wú)需反復(fù)調(diào)整退火溫度或者引物濃度。

你在實(shí)際使用PCR反應(yīng)試劑盒時(shí)，最關(guān)注的是哪個(gè)性能指標(biāo)？